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高QE sCMOS相機在SIM超分辨顯微成像中的應用

SIM需在極低光毒性條件下實現活細胞高速動態成像,故對成像系統靈敏度、噪聲控制、時間分辨率要求極高,某課題組采用中科君達視界自研的千眼狼sCMOS相機Gloria 4.2,量子效率高達95%,開展對生物細胞骨架的超分辨動態成像實驗。

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2實驗目標

I. 評估sCMOS相機在SIM超分辨顯微鏡中對百納米尺度細胞樣本的成像能力。 
II.評估sCMOS相機在低曝光(低光毒性要求)時間下的信噪比表現。

3實驗方法

實驗使用倒置熒光顯微鏡,集成SIM超分辨成像模塊。樣本為熒光標記的細胞骨架,經標準制備后固定于載物臺上。圖像探測采用千眼狼Gloria 4.2 sCMOS相機,設置ROI分辨率為960×368,Binning模式2×2(提升靈敏度),曝光時間10 ms,幀率100 fps,使用外觸發同步,讀出模式選用CMS低噪聲模式,以優化圖像信噪比。

4實驗數據解析

4.1成像性能解析:

10 ms曝光條件下,千眼狼Gloria 4.2相機可實現100 fps幀率采集,優于同條件下EMCCD相機,后者僅支持10 ms內30 fps采集幀率,圖像數據獲取效率較低。 

4.2 圖像質量解析:

  • 單幀圖像:10 ms曝光下,sCMOS相機捕捉的圖像計算重構后可呈現細胞骨架的輪廓微絲網絡結構(圖1),纖維走向、分支結構等特征初步可辨識,清晰可見微管纖維的局部交叉點且無拖影現象,證明低光強下擁有95%高QE、100 fps采集幀率的sCMOS相機可有效捕獲微弱熒光信號。

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圖1

  • 合成圖像:經SIM算法重建后,合成圖像分辨率達到約100 nm,突破衍射極限,使得微管纖維的分支點、交叉形態清晰可辨,且憑借Gloria 4.2相機高動態范圍(16 bit),合成圖像在弱信號區域(如細胞基質)與強信號區域(熒光團聚集處)均表現出良好的線性響應與細節保留能力,未出現飽和現象。

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圖2

本次實驗成功將高量子效率 95%的sCMOS相機 Gloria 4.2集成于SIM超分辨顯微系統,實現了在100 fps下對細胞樣本的百納米級分辨率成像。實驗結果表明,中科君達視界自研的千眼狼sCMOS相機適用于低光毒性、低噪聲、高速的生命科學領域圖像探測任務。

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